Il Santuario, incastonato in una rupe dei Monti Prenestini, domina le vallate circostanti, offrendo un profondo senso di pace e un magnifico panorama; sorge vicino al luogo dell’apparizione del Cristo tra le corna del cervo, che portò alla conversione di Sant’Eustachio. Il fatto è inciso su una tavola di quercia del XII sec., che racconta anche della mitica fondazione, risalente a Costantino e a Papa Silvestro, che farebbe di questo luogo il Santuario Mariano più antico d’Italia. Sull’altare principale, la statua lignea della Madonna col Bambino (XI-XII sec.) accoglie ogni pellegrino. Nel ‘600 il padre gesuita Kircher, il cui cuore è sepolto ai suoi piedi, si occupò del restauro dell’edificio. Giovanni Paolo II, scelse questo luogo tanto amato da Cardinale, come il primo da visitare appena eletto Papa.